ABSTRACT
ABSTRACT: Methicillin resistance in the Staphylococcus intermedius group (SIG) has emerged in small animal practice. Methicillin-resistant SIG (MRSIG) members have been implicated as causes of infections in both companion animals and humans. Staphylococcal cassette chromosome mec (SCCmec) elements carry the mecA/C genes, which encode for the transpeptidase PBP2a (PBP2') responsible for β-lactam antibiotic resistance in staphylococci. This study examined the SCCmec types of MRSIG isolates from different clinical specimens of dogs that exhibited methicillin MIC ≥ 0.5 μg/mL by an automated identification and susceptibility system in a Center for Veterinary Diagnostics in São Paulo, Brazil. Susceptibility to methicillin was determined by broth microdilution testing, and Oxoid® M.I.C.Evaluator® strips. PBP2a production was detected using a latex agglutination assay. SCCmec typing was performed according to the International Working Group on the Classification of Staphylococcal Cassette Chromosome Elements (IWG-SCC) guidelines. SCCmec type II (2A), SCCmec type III (3A), composite SCC structures consisting of a class A mec gene complex in addition to multiple ccr gene complexes, and non-typable SCCmec elements were reported in these MRSIG isolates. SCCmec type variants differing from those so far acknowledged by IWG-SCC were found, indicating new rearrangements in the genetic context of mecA in these canine MRSIG isolates.
RESUMO: A resistência à meticilina no grupo Staphylococcus intermedius (GSI) tem aumentado na clínica de pequenos animais. Membros GSI resistentes à meticilina (GSIRM) têm sido causas de infecções tanto em animais de companhia e humanos. Cassetes cromossômicos estafilocócicos mec (SCCmec) carregam os genes mecA/C, que codificam a transpeptidase PBP2a (PBP2') responsável pela resistência aos antibióticos β-lactâmicos em estafilococos. Nosso objetivo foi investigar os elementos SCCmec de GSIRM isolados de diferentes amostras clínicas de cães que exibiram CIM de meticilina ≥ 0,5 μg/mL por meio de um sistema automatizado em um Centro Veterinário de Diagnósticos em São Paulo, Brasil. A sensibilidade à meticilina foi determinada por meio do teste de microdiluição em caldo e fitas Oxoid® M.I.C.Evaluator®. A produção de PBP2a foi detectada usando um ensaio de aglutinação de látex. A tipagem dos elementos SCCmec foi realizada de acordo com as diretrizes do International Working Group on the Classification of Staphylococcal Cassette Chromosome Elements (IWG-SCC). SCCmec tipo II (2A), SCCmec tipo III (3A), SCC compostos de um complexo mec de classe A com múltiplos complexos ccr, e elementos SCCmec não tipáveis foram encontrados nesses isolados GSIRM. Variantes que diferem dos elementos SCCmec reconhecidos até o momento pelo IWG-SCC foram encontradas, indicando novos rearranjos no contexto genético de mecA nesses isolados GSIRM caninos.
ABSTRACT
Caseous lymphadenitis is a chronic infectious disease caused by Corynebacterium pseudotuberculosis , which is a bacterium responsible for a great number of economic losses on goat and sheep production. It is characterized by the formation of abscesses in superficial lymph nodes and in internal organs and lymph nodes. This study aimed at determining the agreement between microbiological culture and PCR in the identification of C. pseudotuberculosis , in samples collected from animals in slaughterhouses and in animals that presented lymph node enlargement in field conditions. From the 202 samples analyzed through microbiological culture, 113 (56%) were positive for Corynebacterium sp.; from these positive samples, 38 (34%) were identified as C. pseudotuberculosis by microbiological culture. From the amount of samples, 110 (54%) were positive and 92 (46%) were negative in the PCR. Kappa index (0.193) presented a weak agreement between PCR and microbiological culture. We concluded that molecular diagnosis (PCR) in clinical samples proved to be more efficient, reproducible, and faster than the microbiological culture, both on clinical samples analyses and in the confirmation of C. pseudotuberculosis in colonies that were classified by Corynebacterium genus. Thus, the present study demonstrated the importance of PCR to confirm C. pseudotuberculosis diagnosis, and the best contribution for the epidemiological surveillance of the disease in sheep.(AU)
A linfadenite caseosa é uma doença infectocontagiosa crônica, causada pelo agente etiológico Corynebacterium pseudotuberculosis , que é uma bactéria responsável por grandes perdas econômicas na produção de ovinos e caprinos. Caracteriza-se pela formação de abscessos em nódulos linfáticos superficiais e em órgãos internos e linfonodos. O presente trabalho teve por objetivo verificar a concordância entre as metodologias de isolamento microbiológico com a PCR na identificação do C. pseudotuberculosis , em amostras clínicas colhidas em abatedouros e em animais que apresentavam aumento de linfonodo em condições de campo. Das 202 amostras analisadas no cultivo microbiológico, 113 (56%) foram positivas para o gênero Corynebacterium sp., e 38 (34%) colônias foram identificadas como C. pseudotuberculosis por meio de cultura microbiológica. Das amostras clínicas extraídas, 110 (54%) foram positivas e 92 (46%) foram negativas na PCR. A concordância estimada entre as técnicas de PCR e o cultivo microbiológico pelo indicador Kappa foi considerada fraca (0,193). Concluímos que o diagnóstico molecular (PCR) provou ser mais eficiente, rápido e com reprodutibilidade quando comparado ao cultivo microbiológico das amostras clínicas bem como da confirmação do C. pseudotuberculosis de colônias pertencentes ao gênero Corynebacterium . Dessa forma, o presente trabalho demonstrou a importância do uso da PCR na confirmação diagnóstica do C. pseudotuberculosis , visando contribuir com a melhoria da vigilância epidemiológica da doença em ovinos.(AU)